产品信息
 
产品名称
产品编号
规格
价格（元）
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)
11121ES60
100 T
935.00
 
产品描述
 
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase而开发。该酶热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6 和oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
 
产品组分
 
组分编号
组分名称
产品编号/规格
11121ES60 (100 T)
11121-A
RNase-free H2O
2×1 mL
11121-B
5×gDNA digester Buffer
200 μL
11121-C
gDNA digester
100 μL
11121-D
5×Hifair® Ⅱ Buffer plus
400 μL
11121-E
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix
200 μL
11121-F
Oligo (dT)18 (50 μM)
100 μL
11121-G
Random Primers N6 (50 μM)
100 μL
【注】：1）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus包含gDNA digester抑制剂和dNTP。
2）Hifair® Ⅱ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
 
运输和保存方法
 
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
 
注意事项
 
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。
2）建议RNA是溶于水而不是TE中，因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应。
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit（Cat#11119）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11119ES中的5×Hifair® Ⅱ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA去除反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
 
关于逆转录引物的选择
 
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
3）Random Primers N6适用性较广，适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。
4）使用Random primers N6，进行2 kb以下的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成时，Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。
 
第一链cDNA合成操作步骤
 
一、若实验需要去除残留基因组DNA
1. 在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
组分
使用量
RNase-free H2O
To 10 μL
5× gDNA digester Buffer
2 μL
gDNA digester
1 μL
Total RNA
1 ng -5 μg*
or mRNA
1 ng-500 ng*
【注】：* 若后续实验为qPCR，Total RNA投入量为1 ng -1 μg；mRNA的投入量为1 ng-100 ng。若基因的表达丰度很低，最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分
使用量
RNase-free H2TUNEology 波长可调检测卡盒-->