柱式超纯小RNA提取试剂盒 
柱式超纯小RNA提取试剂盒
产品说明：
本产品为 small RNA 提取而开发的新一代产品，可用于各种样本（细胞、动物组织、植物组织 等）中 small RNA 的提取，也可用于 total RNA 的提取。该试剂盒中的裂解液针对 small RNA 提取 进行了优化，具有较强的裂解能力和灵敏度。专门研制的吸附柱采用玻璃纤维素膜，大大增强了 small RNA（<200 nt）结合效率。每个吸附柱每次可处理 30-50 mg 动物组织、100 mg 植物组织或 1×107细胞。得到的 small RNA 纯度更好，质量更高，1 h 内即可完成所有操作。提取的 RNA 没有 DNA 和蛋白污染，可用于 Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分 子克隆。
产品组份：
实验准备：
1. 用户需自备的材料：氯仿。
2. 第一次使用前请按瓶标在漂洗液 1（WB1）和漂洗液 2（WB2）中加入无水乙醇，并做好 标记。
操作步骤：
对 small RNA 的纯度要求较高时，比如在研究 miRNA 芯片、miRNA 克隆时建议采用此方法。
1. 柱平衡步骤：
向吸附柱和 small RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中）分别加入 500 µL 柱 平衡液，12000 rpm 离心 2 min，弃除收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2. 样品处理：
a） 动植物组织：将组织在液氮中磨碎，每 30-50 mg 动物组织或者 100 mg 植物组织加 1 mL 裂解液，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液体积的 1/10。
b） 单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每 10 cm2面积加 1 mL 裂解液，用 取样器吹打几次。 注：裂解液的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取 的 RNA 中有 DNA 污染。
3. 细胞悬液：
400×g 离心 5 min 收取细胞，弃上清。加入 1 mL 裂解液，振荡器振荡或移液器 吸打数次混匀。加裂解液前不要洗涤细胞，以免降解 RNA。将匀浆样品在室温放置 5 min，使得核 酸蛋白复合物完全分离。
4. 4℃ 12000 rpm 离心 5 min，取上清转入一个新的 RNase-free 离心管中（可选）。
注：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。 离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量 DNA，RNA 存在于上清溶液中。
5. 加入 200 µL 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡 15 s，室温放置 5 min 。
6. 4℃ 12000 rpm 离心 15 min，样品会分成三层：粉色的有机相，中间层和无色的水相，RNA 主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液的 50%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。
7. 量取转移液的体积，缓慢加入转移液体积 0.43 倍的无水乙醇（如 500 µL 的转移液加 215 µL 无水乙醇），混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中，室温 12000 rpm 离心 30 s，若一次不能将全部溶液和混合物加入向吸附柱中，请分两次转入，离心后弃掉吸附柱， 保留流出液。
8. 量取流出液的体积，缓慢加入流出液体积 0.75 倍的无水乙醇（如 700 µL 的流出液加 525 µL 无水乙醇），混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入 small RNA 吸附柱中， 室温 12000 rpm 离心 30 s，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中，请分两次转入，离心后 弃掉流出液，保留吸附柱。
9. 向吸附柱中加入 500 µL 漂洗液 1（WB1）（请先检查是否已加入乙醇），室温 12000 rpm 离 心 30 s，弃废液。
10. 向吸附柱中加入 500 µL 漂洗液 2（WB2）（请先检查是否已加入乙醇），室温 12000 rpm 离心 30 s，弃废液。
11. 重复操作步骤 10 一次。
12. 将吸附柱放入 2 mL 收集管中，室温 12000 rpm 离心 3 min，去除残余液体。
13. 将吸附柱转入一个新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，加 30 µL RNase-free ddH2O，室温放 置 1 min，12000 rpm 离心 1 min。所得的 small RNA 溶液请立即使用或适量分装后放置在-80℃保存。
注：RNase-free ddH2O 体积不应少于 30 µL，体积过小影响回收效率。如果想提高 RNA 得率， 可重复上步操作一次。
补充说明
本试剂盒也可用于 total RNA 的提取，提取的 total RNA 中含有各种 small RNA。对 small RNA 的纯度要求不高时，比如用于 RT-PCR、Northern blot 时也可以采用此方法。
1. 按操作步骤 1-6 进行操作。
2. 量取转移液的体积，缓慢加入转移液体积 1.5 倍的无水乙醇（如 500 µL 的转移液加入 750 µL 无水乙醇），混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中，室温 12000 rpm 离心 30 s，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱，请分两次转入，离心后弃掉流出液，保留 吸附柱。 3. 向吸附柱中加入 500 µL 漂洗液 1（WB1）（请先检查是否已加入乙醇），室温 12000 rpm 离 心 30 s，弃废液。
4. 向吸附柱中加入 500 µL 漂洗液 2（WB2）（请先检查是否已加入乙醇），室温 12000 rpm 离 心 30 s，弃废液。
5. 重复补充说明 4 一次。
6. 将吸附柱放入 2 mL 收集管中，室温 12000 rpm 离心 3 min，去除残余液体。
7. 将吸附柱转入一个新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，加 30-100 µL RNase-free ddH2O，室温 放置 1 min，12000 rpm 离心 1 min 得到 RNA 溶液。所得的 RNA 溶液应立即使用或适量分装后放置 在-80℃保存。
注：洗脱缓冲液体积不应少于 30 µL，体积过小影响回收效率。如果想提高 RNA 得率，可重复 上步操作一次。
注意事项：
1． 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放 于普通住宅区。
2． 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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