产品信息

    

        

            

            
产品名称
            
            

            
产品编号
            
            

            
规格
            
            

            
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价格（元）
            
        
        

            

            
Protein A/G Agarose Resin 4FF 蛋白A/G琼脂糖快速纯化树脂
            
            

            
36404ES08
            
            

            
5ml
            
            

            
4℃
            
            

            
978.00
            
        
        

            

            
Protein A/G Agarose Resin 4FF 蛋白A/G琼脂糖快速纯化树脂
            
            

            
36404ES25
            
            

            
25ml
            
            

            
4℃
            
            

            
3186.00
            
        
        

            

            
Protein A/G Agarose Resin 4FF 蛋白A/G琼脂糖快速纯化树脂
            
            

            
36404ES60
            
            

            
100ml
            
            

            
4℃
            
            

            
8726.00
            
        
    

产品描述
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。然而两者结合特异性上有所不同（详细见附录1，蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表），如蛋白G对人IgG3，大鼠IgG2a，绵羊IgG1具有很高的亲和力，但蛋白A对这些Ig结合力很弱。蛋白A，蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上，直接用以做免疫沉淀（IP）或者免疫共沉淀（Co-IP）来进行蛋白功能相关研究，或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。
本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品同时将蛋白A和蛋白G共价偶联到琼脂糖凝胶微球表面，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig，实用性更高。
产品性质

    

        

            

            
基质（Matrix）
            
            

            
高度交联的4%琼脂糖微球
            
        
        

            

            
配体（Ligand）
            
            

            
重组蛋白A/G
            
        
        

            

            
孔径（Bead size）
            
            

            
45-165μm
            
        
        

            

            
最大流速（Flowmax）
            
            

            
0.3MPa,3bar
            
        
        

            

            
储存缓冲液（Buffer）
            
            

            
含20%乙醇的1×PBS
            
        
        

            

            
载量（Capacity）
            
            

            
约20mg human IgG/ml 基质
            
        
        

            

            
pH范围（pH range）
            
            

            
3-10
            
        
    

运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存，2年有效。
需准备试剂
【注】：建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
交联缓冲液：0.2M 三乙醇胺，pH8.2
终止液：50mM Tris-HCl，pH 7.5
 
 
 





使用方法
一、免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）:
1蛋白样品的准备：
① 贴壁细胞：取10 cm细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤2次，然后加入500 μl至2 ml细胞裂解液裂解细胞（如RIPA裂解液）；
② 悬浮细胞：离心收集细胞后，PBS洗涤1次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解；
③ 动植物组织样本：参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解；
【注意】：a）具体的裂解方法，应参考不同裂解液的详细使用方法；b）不同量的细胞，应选用适当裂解液的用量进行裂解（如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量），通常裂解液最终总蛋白浓度选择在0.5-1ug/ul范围内较合适；c）可选：细胞或组织处理时加入广谱核酸酶Benzonase（Yeasen Cat#20125），能够降解所有形式的DNA和RNA(单链、双链、线形和环状)，而无蛋白水解活性。此步操作可以降低背景，保障实验的可重复性。
2 去除非特应性结合（可选）：
① 取0.2-1 ml 细胞或组织裂解液，蛋白量约为0.2-1 mg，加入约1 μg和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20 μl充分重悬的Protein A/G Agarose Resin 4FF，4℃缓慢摇动30 min~2 h。
② 2500 rpm（约1000g）离心5min，取上清用于后续的免疫沉淀。
【注】：所谓种属相同的IgG是指与后续免疫沉淀用一抗宿主相同的正常IgG。此步骤可以预先去除样本与Protein A/G Agarose Resin 4FF的非特异性结合，降低背景。
3 免疫沉淀：
1）抗体吸附
① 取适量Protein A/G Agarose Resin 4FF加入到2ml离心管中，500rpm离心1min，吸弃上清。
②