蛋白乙酰化（Protein Acetylation）是最早被发现、也是研究最广泛的一类酰基化修饰，尤其是赖氨酸乙酰化（Lysine acetylation, Kac）。它广泛存在于核、质和线粒体蛋白中，在转录调控、染色质重构、代谢调节等生物过程中发挥关键作用。随着质谱（Mass Spectrometry, MS）技术的发展，研究人员得以从全组学层面对乙酰化修饰进行高通量、定量和位点特异的分析。

一、赖氨酸乙酰化修饰的特点及检测难点

1、修饰位点多样：广泛分布在转录因子、组蛋白、代谢酶等蛋白上；

2、丰度低、动态性强：Kac修饰在总蛋白中的丰度极低（<0.1%）；

3、质量偏移明确：+42.0106 Da，可被高分辨质谱清晰捕获；

4、位置特异性要求高：需要精确定位于特定赖氨酸位点。

因此，高灵敏度和高特异性的检测策略是成功研究Kac的关键。

二、乙酰化修饰质谱检测的标准流程

1、蛋白提取与酶解

• 使用含脱乙酰酶抑制剂的裂解缓冲液（如Trichostatin A, Nicotinamide）保护内源性修饰；
• 建议使用8 M Urea或SDS裂解体系提取蛋白；
• 常规使用Trypsin进行蛋白酶解，生成可供富集与检测的肽段。

2、乙酰化肽段富集（关键步骤）

由于乙酰化修饰的低丰度，必须先富集后检测：

常用方法：抗乙酰赖氨酸抗体富集（Anti-Kac IP）

• 利用抗体特异识别乙酰化赖氨酸的共价结构；
• 适用于多种样本类型（细胞、组织、临床样本）；
• 可串联富集不同亚细胞组分或修饰类型（如结合TMT标记）。

3、LC-MS/MS 质谱检测

（1）液相色谱分离：NanoLC系统提高分辨率，推荐使用C18反相色谱柱；

（2）质谱平台推荐：

• 高分辨Orbitrap系列（QE HF-X、Exploris 480）；
• timsTOF Pro 2适用于DIA采集模式；

（3）采集模式：

• DDA（数据依赖采集）：适合修饰位点图谱构建；
• DIA（数据非依赖采集）：适合大样本定量分析；

（4）质谱参数设置：

• 预设乙酰化修饰为可变修饰（K+42.0106）；
• MS/MS级别扫描用于确认修饰位置；
• 动态排除避免重复扫描高丰度肽。

4、数据分析与修饰定位

（1）数据库搜索：UniProt物种数据库，设定Kac为可变修饰；

（2）位点定位：使用ptmRS或Ascore算法评估修饰可信度（通常要求置信度 ≥ 0.75）；

（3）定量分析：

• 标签定量：TMT、iTRAQ 等；
• 无标记定量：LFQ、MS1峰面积。

三、进阶策略：提升乙酰化修饰组学分析的深度与通量

四、蛋白乙酰化研究的热门应用领域

质谱技术已成为蛋白乙酰化修饰研究的核心手段。通过科学的样本制备、特异的抗体富集、高分辨率的质谱检测与严谨的数据分析流程，科研人员可以实现对乙酰化修饰的高通量、位点特异和动态定量的全面解析。百泰派克生物科技已构建成熟的蛋白乙酰化组学分析平台，从样本处理、抗体筛选到定量策略全面优化，支持多种模式动物与细胞系，广泛应用于代谢调控、药物靶点发现、疾病机制研究等方向。如您对蛋白乙酰化修饰研究感兴趣，欢迎联系获取完整实验方案或案例报告，我们将为您提供一对一技术支持与免费评估服务！

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百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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