人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）ELISA试剂盒的实验原理-分析方法-资讯-生物在线

人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）ELISA试剂盒的实验原理

作者：上海远慕生物科技有限公司 2016-07-11T00:00 (访问量:3824)

    人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）elisa试剂盒实验原理：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）表达。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）的存在与否。

    人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）ELISA试剂盒操作步骤：

    1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

    2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50µl。然后在待测样品孔先

    加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

    3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

    5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

    7.温育：操作同3。

    8.洗涤：操作同5。

    9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

    10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）ELISA试剂盒计算和结果判定：

    试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD值<临界值（CUTOFF）者为人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）阴性阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）阳性。人甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）ELISA试剂盒的实验原理人ELISA试剂盒远慕生物 ELISA检测试剂盒

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